1992年,马敬涵就读于辽宁省艺术学校,学习京剧表演,专攻老生,武生行当。在校期间,他参加汇报演出《赵氏孤儿》《空城计》《乌盆记》等三十余部剧目。1998年,马敬涵就职于丹东市话剧团,期间出演了《白鹭谣》《小孩遇大祸》《夏天的记忆》等话剧。2002年9月,考入北京电影学院表演系本科班。在校期间,与刘亦菲,江一燕等同班同学一起汇报演出《俄罗斯人》《百花深处》《夜半歌声》等剧目。
2005年,出演个人首部电视剧《散打王》,在剧中饰演文龙,从而正式进入演艺圈。2006年,与李冰冰,黄海冰,陈龙合作主演古装励志剧《剑侠奇缘》,在剧中饰演曹矜；同年,与宋丹丹合作主演青春校园剧《谈谈心恋恋爱》,在剧中饰演男主角刘得华的同学罗鸣。2008年,与温兆伦,王思懿合作主演古装情感剧《大宋才子黄庭坚》,在剧中饰演米芾；同年,与戚迹,祝希娟,陶泽如合作主演古装历史剧《根在中原》,在剧中一人分饰二角,饰演了海盗王,陈佑甫。2009年,与胡歌,白冰,张世合作主演古装穿越剧《神话》,在剧中饰演儒雅智慧且德才兼具的秦始皇大太子扶苏；同年,与马雅舒,陈思成,吴卓羲合作主演民国爱情剧《大丫鬟》,在剧中饰演城府颇深且内心阴暗的萧鸿羽。2010年,与杨幂,冯绍峰,何晟铭合作主演清宫穿越剧《宫锁心玉》,在剧中饰演九阿哥爱新觉罗·胤禟；同年,与黄海冰,李彩桦,陈德容合作主演古装历史探险剧《怒海雄心》,在剧中饰演亦正亦邪且智勇双全的卧底凌非凡；同年,与张庭,李小璐,明道合作主演唐宫悬疑剧《美人天下》,在剧中饰演唐高宗李治的贴身太监元修。2011年,与杜淳,董洁,张嘉倪合作主演古装爱情剧《美人如画》,在剧中饰演精通刺绣的宁王；同年,与杜淳,何晟铭,袁姗姗合作主演清宫穿越剧《宫锁珠帘》,在剧中饰演皇后的弟弟札兰泰；同年,与赵丽颖,戚迹,韩栋合作主演古装爱情励志剧《错点鸳鸯》,在剧中饰演慕容复；同年,凭借电视剧《宫锁心玉》获得“优酷影视指数开年盛典”最具潜力男新人奖。2012年,与何晟铭,张逗逗,金晨合作主演谍战剧《桐柏英雄》,在剧中饰演军人褚一虎；同年,与何晟铭,高洋,蒋梦婕合作主演古装情感剧《功夫乾隆》,在剧中饰演出身神秘且侠肝义胆的叶苍云；同年,与刘涛,黄觉,张国庆合作主演情感悬疑剧《迷局1927》,在剧中饰演善良仗义,乐于助人但叛逆,孤傲的水家二少爷水志云；同年,与余少群,何杜娟合作主演情爱悬疑惊悚电影《地下室惊魂》,在片中饰演狂放不羁的问题青年张鸣。2013年,与杨幂,李易峰,乔振宇合作主演古装魔幻武侠剧《古剑奇谭》,在剧中饰演板蓝根修炼成人的洛云平；同年,与雷佳音,程琤合作主演抗战剧《飞哥大英雄》,在剧中饰演国民党特战队头号杀手凯文；同年,与张翰,杨洋,何晟铭合作主演古装武侠剧《少年四大名捕》,在剧中饰演四大恶人之一的屠晚；同年,主演由李锦航执导的电影《诡替身》饰演男一威廉。2014年,与聂远,金晨合作主演革命战争剧《掩不住的阳光》,在剧中饰演李铭文；同年,与释小龙,蔡文静,陈雅丽合作主演近代传奇剧《无敌铁桥三》,在剧中饰演那桂宝。2015年,与何晟铭,孙坚,jessicacambensy合作主演战争传奇剧《怒海红尘》,在剧中饰演命运多舛的顾云礼；同年,在抗战剧《热血》中饰演韩烨。2016年,与陈赫,金晨,尹正合作主演古装喜剧《极品家丁》,在剧中饰演皇帝赵元羽。2018年,在古装宫廷权谋剧《独孤天下》中饰演元修；同年,主演民国传奇剧《人生若如初相见》；同年,在古装历史剧《天下长安》中饰演徐世勣。2019年,由胡玫执导,与富大龙,马伊琍共同主演的古装院线电影《进京城》,在剧中饰演男一汪润生,并荣获“中加国际电影节最佳男演员”；同年,参演李现,李一桐主演的古装武侠剧《剑王朝》,饰演梁联；同年,参演侯明昊,成毅主演的《怒海潜沙&秦岭神树》,在剧中饰演王祈；同年,主演由雷金克执导的悬疑电影《掘地三尺》,饰演男一何正宇。2020年,主演古装电影《后羿之逐日之战》饰演男一后羿。2021年,主演由朱少杰执导的抗战剧《三道塬》,在剧中饰演男一共产党员蔡葆梓。2022年,参演电视剧《迷雾之境》；4月6日,参演由高希希,赵立军执导,与冯绍峰,陈宝国共同主演的历史剧《山河月明》播出,在剧中饰演忠肝义胆的张玉；同年,出演由郭虎,任海涛执导,与成毅,曾舜晞,肖顺尧,陈都灵主演的古装武侠悬疑剧《莲花楼》,饰演玉楼春；7月20日,参演由郭虎,任海涛执导,杨紫,成毅联袂主演的电视剧《沉香如屑》在优酷播出,在剧中饰演泠疆；8月1日,由潘军执导,与何冰,张国强共同主演的现实题材电视剧《分界线》在江苏卫视,爱奇艺,优酷,腾讯视频开播,在剧中饰演冯轩；同年,主演由刘斌执导的古装悬疑系列电影《大明仵作》,饰演赵鹏；12月26日,参演由尹涛执导,李宏毅领衔主演的古装武侠剧电视剧《少年歌行》播出,在剧中饰演白发仙；同年,参演由董亚春执导,佟瑞欣,马晓伟主演的革命历史剧《天下同心》,饰演向北。2023年,参演由尹涛执导,白敬亭,宋轶领衔主演的古装成长爱情剧《长风渡》,饰演刘春；同年参演由郑晓龙,安战军执导,罗晋,马思纯领衔主演的抗战剧《侦察英雄》。7月23日,主演的电视剧《莲花楼》播出。马敬涵光影写真马敬涵绅士时尚写真马敬涵时尚写真合辑马敬涵丛林写真马敬涵休闲写真马敬涵生活写真马敬涵童趣写真中加国际电影节《大明仵作》饰赵鹏《独孤天下》马敬涵饰元修《热血》马敬涵饰韩烨《人生若如初相见》马敬涵饰易连怡《大丫鬟》马文龙饰萧鸿羽《宫锁心玉》马文龙饰九阿哥胤禟《美人天下》马文龙饰元修《神话》马文龙饰扶苏公子
马敬涵的演技精湛,扎实,他的可塑性极强。马敬涵对每一个角色都刻画得入木三分,深入人心。马敬涵拥有帅气的外形,他都市感十足,眼神中带点坏坏的样子,极具迷人魅力。