于小慧早期1965年12月20日,于小慧出生于辽宁省丹东市。1983年,18岁的于小慧高中毕业后考入了沈阳话剧团。
1992年,参演的电影《新中国第一大案》播出,在剧中饰演文仪；同年,主演的电影《黑色闪电》播出,在剧中饰演秦姣；同年主演的电视剧《血战奉阳城》播出,在剧中饰演白梅。1993年,主演的电影《血染桃花水》播出,在剧中饰演卓洛娃；同年,主演的电影《鸳梦惊魂》播出,在剧中饰演李莎。1994年,主演的电影《四大天王》播出,在剧中饰演李睡莲和李梦莲；同年,与寇振海合作出演电视剧《张学良与郭松龄》。同年,参演电视剧《住别墅的女人》。1995年。在电影《主仆历险记》中饰演罗娜。于小慧-慕容秋1996年,在陈家林执导的古装历史剧《汉武帝》中饰演卫子夫；同年,与张丰毅,尤勇,吴越主演军事题材剧《和平年代》,在剧中饰演温柔娴静的慕容秋,凭该角色获得中央电视台十佳最受欢迎女演员奖。1997年,主演的电视剧《追逐墨尔本》播出。1998年,主演的电视剧《乱世英豪》播出；同年,主演的电视剧《汉刘邦》播出。1999年,与申军谊,李强主演申亭亭执导的情感剧《有多少爱可以重来》,在剧中饰演女强人吴丹妮；同年,主演的电视剧《警网雄风》播出。2000年,主演的电视剧《警戒线》播出,在剧中饰演程梦丽。于小慧_《情有千千劫》剧照2001年,搭档李幼斌,白凡主演犯罪题材剧《情有千千劫》和《法不容情》；同年,领衔主演的电视剧《潜罪》播出,在剧中饰演童文慧；同年参演电视剧《生命逃亡》。2002年,联合寇振海,沈丹萍共同主演爱情剧《镜花水月》,在剧中饰演林臻；同年,在电视剧《烧锅屯钟声》中饰演杨天虹,该剧获得第24届中国电视剧飞天奖中短篇电视剧二等奖。2003年,与程煜主演警匪剧《荣誉》,在剧中饰演心狠手辣的女老板沈玫；同年,与郭冬临,张凯丽主演家庭伦理剧《太太反击战》；同年,参演王小康执导的爱情剧《爱我你怕了吗》,在剧中饰演罗婉珍。于小慧剧照2004年,联合王学圻,王茜华主演商业剧《情暖珠江》,在剧中饰演舒默；同年,与程煜主演讲述“警察荣誉”题材的电视剧《步步紧逼》；同年,与许亚军,张恒主演医药研究及制药领域故事的电视剧《黑色郁金香》；同年,出演袁泉,吴若甫主演的都市悬疑剧《爱在边缘》；同年参演电视剧《守候阳光》《婆婆》以及《惩腐女人》。2005年,再次搭档郭冬临,张恒主演中国内地首部揭露传销黑幕的电视剧《上线》；同年,出演再现郑和下西洋的历史剧《大航海》；同年,与舒畅,赵琳主演讲述残疾人群体生活及情感世界的励志情感剧《花开有声》,在剧中饰演杨柳；同年,在家庭伦理剧《莫让情两难》中饰演齐蕊；同年,与符馨尹,梁静,张恒主演女性情感故事系列剧《都市女人.com》。于小慧的卫子夫皇后剧照2006年,搭档佟瑞欣,郑晓宁主演农村题材电视剧《春暖南粤》,凭借饰演的林英琴一角获得第二届新农村电视艺术节最佳女主角；同年,与廖京生,尤勇,何晴主演婚恋伦理剧《谁是我爸爸》；同年,出演讲述家族恩怨情仇的都市悬疑剧《朋友的朋友是朋友》；同年主演的电视剧《爱你那天正下雨》播出,在剧中饰演黎恩。2007年,和程煜主演的农家系列剧《喜庆农家》；同年,与李立群,奚美娟主演家庭剧《小家大事》；同年,在孙斯阳,张蕊主演的少儿科幻剧《快乐星球》中饰演晓璐母亲。2008年,在《周恩来在重庆》中饰演宋美龄。2009年,在宋春丽,李成儒主演的情感剧《穷妈妈富妈妈》中饰莫莉；在唐国强执导的《解放》中出演宋美龄。同年,参演的电视剧《龙须沟》播出。于小慧2010年,出演高天,马恩然主演的年代剧《天下裘都》,参演的电视剧《决战南京》《解放大西南》播出,在剧中饰演宋美龄。2011年3月22日,参演的电视剧《东方》登陆央视一套黄金档,在剧中饰演宋美龄；同年,参与陈龙,石琳主演的史诗传奇剧《大矿山》；同年,在马少骅,姚居德主演的革命剧《辛亥革命》中饰演倪桂珍。2012年,出演家庭时尚偶像剧《亲情保卫战》；同年,在古装悬疑侦探剧《大明按察使》中饰演高夫人；同年,参摄了舒畅,陈键锋,乔振宇主演的民国激战情感剧《烽火佳人》。2013年,主演动作偶像剧《爱的保镖》播出,在剧中饰演许淑贞；同年,在徐帆,王建福主演的家庭伦理剧《更年期的战争》中饰演徐爱华；同年,客串出演现代时尚医疗职场剧《产科医生》。2015年1月,在年代悬疑剧《心如铁》中饰演王其美之妻,把一名经历丧子之痛后又失而复得的母亲演绎的淋漓尽致；8月15日,和夏绍航,黄妍菲等联袂主演的励志电影《本色兵》上映。2016年2月,参演的时尚青春励志剧《幸福巧克力》在深圳拍摄,在剧中饰演外表强势,爱子心切的时尚妈妈段陈韵梅；3月,与张洪睿,乔振宇领衔主演的民国题材剧《浴血重生》登陆深圳电视剧频道黄金档,在剧中出演卢家大太太上官云一角。同年,主演的电视剧《三十年河东》播出,在剧中饰演张悯梅。2017年,在唐国强,刘劲主演的革命历史剧《换了人间》中出演孙中山夫人宋庆龄；同年,出演马鲁剑执导的现代新农村题材剧《梨花朵朵开》。2020年,主演的电影《征迁》播出,在剧中饰演陈初欣。2023年4月20日,参演的网剧《悦香甜心》在无锡荡口古镇开机。
于小慧写真集于小慧是沈阳人,家中兄弟姐妹6人。1985年,于小慧与一名高官子弟结婚,诞下一子后,因遭受家暴,丈夫出轨后离婚,并拿到了儿子的抚养权,当时的于小慧只能靠话剧团的微薄工资艰难度日。进入90年代后,于小慧开始了经商事业。2006年被深圳市政府作为文化人才引进。
2008年,于小慧接受中国红十字基金会邀请,担任“中国红十字基金会爱心天使”。
演员于小慧她会活到老演到老,她的气质很独特。在生活中,她是很平和的不张扬的人。从演员的角度来说,她很敬业。表演朴实感情细腻戏路比较宽。她很勤奋,能够吃苦,创作精力很旺盛。在于小慧已经从影十多年以后,各方面条件都很优裕的情况下,还能够热爱表演,保持认真创作的态度,这很难得。并且在多年积累演技日益成熟后,演戏能够投入豁得出去。小慧有典型的东北女子的率性和直爽,她能够把戏演好的同时,还能把生意做得风生水起。就说明她是很聪明的。她为了保持体型,每天都坚持跳操两小时。她是一个对自己要求很严格的人。